材料和方法

1.1病毒犬瘟熱病毒強毒LPCD208株，由李金中等:分離獲得,經何洪彬等人工感染犬試驗表明,該強毒對犬免疫原性良好.

1.2試驗犬2到3月齡CDV易感仔犬數十只，選自黑龍江省軍區軍大訓練隊

1.3抗原的制備使用犬瘟熱病毒強毒LPCD208株以10%的量接種于單層犬腎傳代細胞(DK).上,37°C培養96h后收獲病變細胞,連同上清一起凍融3次,作為毒種,一70°C 保存.其毒價(TCID)為10~/0.1ml.

1.4高壓滅活疫苗的制備

1.4.1適滅活壓力和滅活時間的選擇取收獲的CDV細胞培養物凍融液,按10ml/袋分裝,在100Mpa, 150Mpa,200Mpa,250Mpa,300Mpa,350Mpa的靜水壓力下分別保壓滅活15,30,45,60min,取樣以10的量單層接種DK細胞,37"C培養96h,檢查有無細胞病變以選擇適滅活壓力和滅活時間.

1.4.2疫苗的制備取收獲的CDV凍融液,按100ml/袋分裝經適滅活壓力和滅活時間進行滅活，再按2:1的比例混臺蜂膠佐劑,制成犬瘟熱病毒的高壓滅活疫苗,疫苗中的病毒含量調整為1OTCID./ml.

1.5對照滅活疫苗即犬瘟熱病毒的福爾馬林滅活苗取收獲的DCV細胞培養物凍融液，加lo福爾馬林溶液滅活48h,，按2:1的比例加人蜂膠佐劑,制成福爾馬林滅活苗,疫苗中的病毒含量也調整為1OTCID拍/ml.

1.6無菌檢驗取少量的上述高壓滅活苗和福爾馬林滅活苗分別接種于普通瓊脂，血斜和肉湯培養基中，按常規方法檢測有無細菌生長.

1.7安全性試驗選用CDVSN抗體小于1:2的易感仔犬15只,每組5只.第1組和第2組為試驗組，每組每只依次注射CDV的高壓滅活疫苗和2000,34(2):6~ 8/夏成柱,等中國獸藥雜志福爾馬林滅活苗各10ml,口鼻滴人各5ml;第3組.的5只犬不接種作正常對照隔離飼養14d,每天作體溫,呼吸,精神,食欲，糞便,尿性狀等臨床觀察

1.8免疫原性試驗選取2到3月齡CDV易感仔犬65只，分為7組,第1~3組為犬瘟熱高壓滅苗組,每組各10只犬，分別肌肉注射犬瘟熱病毒高壓滅活苗4ml,2ml,lml,第4~6組為犬瘟熱福爾馬林滅活苗組,每組各10只犬，分別肌肉注射犬瘟毒福爾馬林滅活苗4ml,2ml,ml,第7組5只犬不接種作為對照組.以組為單位隔離飼養,于接種后第14d采血作DCVSN抗體效價測定試驗第14d所有犬均肌肉注射CDV強毒LPCD208原液4ml,隔離飼養，當只對照犬全部呈現犬瘟熱臨床癥狀與病理解剖學變化時，以能使10只試驗犬中9只以上完全保護的CDV滅活苗低接種量即為其低免疫量.

1.9臨床應用試驗在黑龍江和沈陽兩地選取幼犬200只，使用在250Mpa靜水壓保壓滅活30rain的犬溫熱高壓滅活苗.按免疫原性試驗結果中的低免疫劑量給每條試驗犬注射2ml滅活苗,臨床觀察數月.