A16病毒體外藥效甘露消毒丹對hela培養細胞中CoxA16病毒的抑制作用

方法:運用細胞培養技術,分別將甘露消毒丹中藥煎劑,含藥血清和利巴韋林注射液作用人宮頸癌(hela)細胞,同時設正常細胞和病毒對照組,通過直接抑毒實驗,治療性抑毒實驗,干預性抑毒實驗3組實驗觀察甘露消毒丹對hela培養細胞中CoxA16病毒的抑制作用,并與利巴韋林注射液作對照;采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測治療性抑毒實驗各組hela細胞上清液中人(INF-γ)干擾素的水平;運用透射電鏡技術分別觀察加入甘露消毒丹2h,8h,16h,24h后的hela細胞超微結構.

作為一種常規檢測病原微生物的方法,ELISA因其快速,靈敏,經濟及可規模化的優點廣泛應用于病原檢測中,同時能夠簡便地應用于CoxA16流行病學調查和臨床病原檢測.本研究以多抗為基礎建立CoxA16抗原檢測的雙抗體夾心ELISA法,通過方陣法和單因素法分別對ELISA體系的包被抗體濃度,酶標抗體濃度,包被液,封閉液,封閉時間,樣品孵育時間,酶標抗體孵育時間,顯色液及顯色時間等條件進行優化,確定優化的ELISA檢測體系.

結果:(1)根據Reed-Muench法計算得出CoxA16病毒的TCID50=10-5.361/mL;

(2)甘露消毒丹中藥煎劑安全濃度是12.5mg/ml,利巴韋林注射液安全濃度是12.5mg/ml.

(3)治療性抑毒實驗中甘露消毒丹中藥煎劑抗CoxA16病毒作用強,直接抑毒實驗次之.兩組實驗中各藥物組與病毒對照組OD值有顯著差(p0.05),甘露消毒丹中藥煎劑組與含藥血清組OD值有顯著差異(p0.05),甘露消毒丹中藥煎劑和利巴韋林組兩組比較,差異明顯(p0.05),利巴韋林組與甘露消毒丹含藥血清組兩組無明顯差異.干預性抑毒實驗中甘露消毒丹中藥煎劑的抗CoxA16病毒作用相對較弱,并且各藥物組抗CoxA16病毒作用無明顯差異.

(4)酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測治療