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腺病毒的熱滅活方法在熱滅活期間保護含有AAV顆粒和輔助病毒顆粒的樣品中AAV病毒顆粒基因組完整性和/或生物活性的方法。方法包括將含有輔助病毒顆粒、AAV顆粒和緩沖液的樣品加熱到45°C以上的溫度。所述緩沖液包括濃度10mM以上的親液鹽和或濃度10mMl以上的二_價或三價陽離子、或濃度為10mM或以上的親液鹽。方法包括將樣品加熱至大于或等于45°C、大于或等于46°C、大于或等于47°C、大于或等于48°C、大于或等于49°C、大于或等于50°C、或大于或等于51°C的溫度。在某些實施例中,樣品被加熱至45°C和65°C之間、45°C和60°C之間、 45°C和55°C之間、47°C和53°C之間、 48°C和51°C之間、或48°C和50°C之間的溫度。例如,在某些實施例中,樣品被加熱至48°C和50°C之間、或至48°C或49°C。加熱樣品的時間可以變化。例如,在某些實施例中,樣品加熱至目標溫度1分鐘到6小時之間,諸如10至180分鐘之間、20至180分鐘之間、20至60分鐘之間、或20至40分鐘之間。通常的,較高溫度或加速輔助病毒顆粒滅活的其他條件與相對短暫的加熱時間結合使用,反之亦然。在一些方法中使用了含有濃度10mMI以上的二價或三價金屬陽離子的緩沖液。示例性陽離子包括下述金屬的陽離子:形成如Mg2+、Ca2+、Mn2+、Ni2+. Zn2+、 Co2+、 Sr2+、 Cu2+、Cr2+和Sc3+的陽離子的Mg、Ca、 Mn、Ni、 Zn、 Co、 Sr、 Cu、 Cr、 Fe和Sc。 在某些實施例中所述緩沖液包含濃度10mM以上的Mg2+和/或Ca2+。在一組含有濃度10mMI以上的二_價或三價金屬陽離子的緩沖液中,濃度大于15mM。例如,陽離子濃度可以大于20mM,大于50mM,于100mM,或大于200mM。在另一組含有濃度 10mMl以上的二價或三價金屬陽離子的緩沖液中,濃度是從10mM至500mM。例如,陽離子濃度可以從20mM至400mM, 30mM至300mM, 50mM至250mM, 70mM至200mM,或濃度為50mM、100mM、 150mM或200mM。在某些方法中使用了含有濃度10mMI以上的親液鹽的緩沖液。示例性親液鹽包括硫酸銨、乙酸銨、檸檬酸鈉、乙酸鈉、硫酸鈉、磷酸鉀和氯化銫,它們可以單獨使用或以任何組合使用。如果存在的話,親液鹽通常以超過10mM的濃度使用,如在0.1M和1M之間;在0.2M和0.8M之間;在0.3M和0.7M之間;在0.4M和0.6M之間;或0.5M。在某些方法中,使用的緩沖液含有離液鹽。在-組含有離液鹽的緩沖液中,離液鹽是尿素鹽或胍鹽。在某些方法中,使用的緩沖液含有多元醇。在-組含有多元醇的緩沖液中,元醇是甘油、丙二醇或1, 6-2二醇。在某些方法中,緩沖液在4°C和70°C之間的溫度范圍內可保持pH值。一組緩沖液在4°C和70°C的溫度之 間內可保持pH值在3.0和10.0之間。另一組緩沖液在4°C和70°C的溫度之 間內可保持pH值在7.0和9.0之間。在某些方法中,緩沖液為tris緩沖液、 磷酸鹽緩沖液、三唑胺緩沖液或1, 3-二[E(羥甲基)甲氨基]丙烷(BIS-TRIS propane)緩沖液。在- -組tris和1, 3-二[三(羥甲基)甲氨基]丙烷緩沖液中,緩沖液包含附加成分,包括HEPES、檸檬酸鹽(citrate)、 NaC和普朗尼克(Pluronic)F68。在-組1, 3-二[三(羥甲基)甲氨基]丙烷緩沖液中,緩沖液包含40mM 1, 3-二[三(羥甲基)甲氨基]丙烷、20mM HEPES、20mM檸檬酸鹽、200mM NaCI、和0.001 %(重量體積比w/v)普朗尼克F68。
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