(一)病毒

1.毒株:應采用SARS流行期臨床分離且經相關部門J確證的SARS病毒毒株(建議選用2-3株)。

2.毒種庫:試驗前將病毒先在敏感細胞上傳數代，增加毒力，待毒力穩定后，收獲病毒分裝-.定數量的小管，在-80C低溫冰箱或液氮冷凍保存備用。

3.檢定:毒種庫毒種須經外源因子檢測合格后方可用于篩選試驗，每次試驗取一-支，不得回凍再用于篩選。

(二)細胞

1.細胞株:選用對SARS病毒敏感的傳代細胞株，如Vero E6、 2BS細胞等。

2.細胞庫:收集大量培養的細胞分管液氮凍存以保留足夠的傳代細胞。試驗前先復蘇細胞傳數代，使培養細胞生長旺盛穩定后，開始接種細胞培養板進行試驗。

3.檢定:細胞庫細胞須經外源因子檢測合格后方可用于篩選試驗，每次試驗取一-支，不得回凍再用于篩選。

(三)待測藥物

試驗前編號登記、標明藥名、來源、批號、重量或體積、溶媒、溶解度、穩定性和保存條件等。

(四)其他

本試驗研究必須在生物安全3級試驗室進行，毒種的管理使用必須符合的有關規定。

篩選試驗

(一)預備試驗

1.病毒毒力測定

選擇敏感細胞用于病毒培養，加入10倍系列稀釋的5-7個濃度的病毒培養液。適宜條件下培養后每天用倒置顯微鏡觀察細胞病變(CPE) 或用MTT染色法觀察細胞存活狀態，用Reed-Muench法計算病毒半數感染劑量(TCID50),每濃度設4個復孔重復實驗確定毒力。

2.藥物對細胞毒性的測定

以細胞病變或MTT染色法為觀察指標，前法可觀察3-5天,每個藥物至少設4個濃度進行測定，用Reed-Muench法求出對細胞無毒的大濃度(TDO) 和半數中毒濃度(TD50) 。每濃度藥液至少3管，重復試驗3次。

(二)篩選試驗

經預試驗求出病毒的TCID50和藥物的TDO后，在SARS病毒的敏感細胞模型上進行抗病毒活性篩選，適宜的培養液及培養條件培養。96孔板，細胞長成單層后，每孔加100μ1 (100 TCID50左右)病毒感染，吸附2小時后，傾出病毒。然后加入待測藥物，只做一個 大無毒濃度(TDO)，4個孔。 試驗設病毒對照、細胞對照及陽性藥物對照。以病毒對照孔出現病變達75%以上(即4+時)，可終止試驗。倒置顯微鏡觀察對細胞的致病變作用(CPE) ，將給藥孔與病毒對照孔進行比較，如大無毒濃度藥物無抑制病毒CPE作用則不繼續做，如有抑制作用須進行補充試驗。

(三)補充試驗

大無毒濃度(TD0)的藥物如有抗病毒作用，應進行補充篩選試驗。模型和培養條件同上。試驗 設藥物試驗組、病毒對照組及細胞對照組。每孔加入100TCID50左右病毒感染，吸附2小時，傾出病毒。選用大無毒濃度(TDO)藥液，2倍或者10倍系列稀釋的5-7個濃度，每濃度4孔，每孔100μ 1，分別加入未感染或感染的細胞培養孔內，每天用倒置顯微鏡觀察，記錄細胞病變程度。當病毒對照病孔病變達4+時可終止試驗，判定藥物的效果。試驗須重復3次。

用CPE法，對各組進行比較。

用Reed-Muench法計算半數有效濃度(IC50) 及治療指數(TI)。TI =半數中毒濃度(TD50) /半數有效濃度(IC50)以上初篩及進一步藥效評價方法一般是針對治療性給藥(病毒感染細胞后給藥)的藥物;若為預防性藥物，則建議相應調整給藥與感染的順序(病毒感染前給藥，病毒感染時及感染后均應洗去藥物)，以考察其預防效果。